目的：三磷酸腺苷（ATP）是耳蜗中重要的神经活性物质和神经递质，耳蜗中可能分泌ATP的细胞有血管纹缘细胞、内外毛细胞、支持细胞、螺旋神经节细胞，但具体的来源及其分泌的机制不清楚。本研究旨在建立新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞的体外培养体系，纯化并鉴定缘细胞；建立生物发光快速检测缘细胞分泌ATP的方法，并利用该方法检测在毒胡萝卜素、马兜铃酸、肝素等作用下缘细胞内ATP含量的变化，以阐明缘细胞分泌ATP的机制。方法：采用由中国科学院上海实验动物中心提供的出生1到3天的Sprague-Dawley的大鼠，按常规短颈处死，取出双侧颞骨，解剖显微镜下，取出血管纹或含血管纹的螺旋韧带剥离，并将其切成0.5mm大小的微小组织块，进行体外细胞培养，获取培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞。用流式细胞法检测上皮细胞标志性的角蛋白和波形蛋白的纯度，证实培养所获取得细胞为缘细胞。采用生物发光快速检测法（试剂盒CellTiter-Glo 萤光细胞活性检测，美国promega 公司）检测缘细胞分泌至细胞外液中ATP的含量。结果：体外培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞呈不规则，多角形，细胞相互排列紧密，呈现培养的上皮细胞典型的“铺路石”样外观，并可见由数百个缘细胞密集生长组成的折光性强的球形结构。流式细胞法检测上皮细胞标志性的角蛋白和波形蛋白的纯度，证实培养所获取得细胞为缘细胞。CellTiter-Glo 萤光细胞活性检测试剂盒检测到缘细胞中含有ATP。在毒胡萝卜素、马兜铃酸、肝素等作用下缘细胞分泌ATP发生变化。结论：建立了新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞的体外培养体系，建立了缘细胞内ATP生物发光快速检测方法，初步揭示了缘细胞分泌ATP的机制。
