仪器、器材和试剂
5.1仪器、器材 显微镜 改良Neubauer血细胞计数板 一次性20ul定量取血管 洁净小试管
5.2 试剂：10g/L草酸铵稀释液 (自配)
草酸铵 10.0g EDTA-Na2 0.12g
用少量蒸馏水溶解草酸铵及EDTA-Na2，合并后加蒸馏水至1000ml，混匀，过滤后2～8℃冰箱贮存备用。
程序步骤
流程：仪器器材/试剂准备→样本编号→样本混匀→样本稀释及充池→静置10~15min→显微镜下计数→分析检验结果→→结果审核签发。血小板显微镜计数在取血后8小时内完成。在审核检验结果时，应特别注意评价其与可利用的患者有关临床信息的符合性。
6.2 试剂准备 于清洁小试管中加入稀释液0.38ml，准确吸取混匀的抗凝全血20ul，擦去管尖外附着血液，置于相同编号的血小板稀释液内，吸取上清液洗三次，立即充分混匀。待完全溶血后再次充分混匀，取悬液1滴充入计数池内，静置10~15min，待血小板下沉。
6.5 计数 用高倍镜计数中央大方格内的四角和中央共5个中方格内血小板数。
质量控制程序
7.1 定期检查稀释液的质量，检测前应先作稀释液空白计数，计数为零时方可充液计数。
7.2 血液加入血小板稀释液内要充分混匀，但不可过度振荡，以免导致血小板破坏和聚集。
7.3 在充液之前，必须轻轻混匀1min以上，用力不宜过大，否则易造成血小板破坏或产生气泡，引起计数误差。
7.4镜下血小板如成簇分布，应重新采血复查。溶血欠佳时，应更换稀释液或用200倍稀释法计数整个大方格内的全部血小板，最后计算出每升血液中的血小板数量。
7.5 血小板悬液充入计数池内需要静置10～15min，使血小板完全下沉后再计数。保持湿度，避免水分蒸发而影响计数结果。
7.6如果血小板悬液充入计数池后时间较长，血小板会失去光泽而不易辨认，因此应掌握好计数时间。
7.7 计数时光线要适中，注意将有折光性的血小板与杂质、灰尘相区别。附着在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏数。
7.8 每份标本最好计数2次，若计数之差在10%以内，取其均值报告，若计数之差大于10%，应作第3次
计数，取2次相近结果的均值报告。
7.9 草酸铵质量必须是AR级或GR级。
7.10培训操作人员，提高血小板形态辩认能力；定期选择病人样本以双盲法检验，比对每个基础检验人员的检验结果，持续改进检验质量。
8 结果计算及测量不确定度
8.1 结果计算：血小板数/L=5个中方格内血小板数×109/L
8.2测量不确定度 参照CLIA＇88推荐的允许误差，确定本室血小板显微镜计数相对扩展不确定度：±25.0%
9 生物参考区间
成人 男（85～303）×109/L
女（101～320）×109/L
新生儿 （100～300）×109/L
儿童 （100～300）×109/L
10 检验结果可报区间
0.0～3000×109/L
11 警告/危急值
＜50×109/L ＞500×109/L，出现危急值按《危急值报告程序》处理。
12 实验室的结果解释
12.1 生理性变化
正常人血小板数量随时间和生理状态的不同而变化，其变化一天内可达6%～10%。午后略高于早晨；冬季略高于春季；平原居民较高原居民低；月经前减低，月经后升高；妊娠中晚期增高，分娩后减低；运动、饱餐后增高，休息后恢复。静脉血比毛细血管血高约10%。
12.2 病理性变化
（1）血小板增多（＞400G/L）
① 原发性增多：见于骨髓增殖性疾病，如原发性血小板增多症、慢性粒细胞性白血病、真性红细胞增多症和特发性骨髓纤维化等。
② 继发性增多：急性感染、急性失血、急性溶血、缺铁性贫血、脾切除术后、慢性炎症性疾病和恶性肿瘤。
（2） 血小板减少（<100G/L）：除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因，常见于下列疾病： ① 血小板生成障碍：再生障碍性贫血、急性白血病、急性放射病、恶性肿瘤的骨髓浸润、放疗或化疗引起的干细胞损伤、骨髓纤维化等。
② 血小板破坏增多：原发性血小板减少性紫癜（ITP）、脾功能亢进、系统性红斑狼疮（SLE）、毒性弥漫性甲状腺肿、免疫性甲状腺炎、进行体外循环、药物过敏（如奎宁、磺胺药）、大量输血后、新生儿血小板减少症等。
③ 血小板消耗过多：如DIC、血栓性血小板减少性紫癜等。
④ 分布异常：脾肿大时，血小板潴留在脾脏内，导致外周血中血小板减少。
⑤ 血液稀释时，血小板计数亦减少。
⑥ 应用肝素后可发生肝素诱导血小板减少症，约15%～50%患先兆子痫的孕妇在妊娠的最后3个月可逐渐产生血小板减少症
干扰因素、交叉反应及潜在误差来源
14.1 血小板稀释液要清洁，防止微粒和细菌污染，配制后应过滤。试管及吸管应清洁、干净。
14.2 毛细血管采血时针刺应稍深，使血流通畅。拭去第一滴血后，首先采血作血小板计数。静脉采血应迅速，防止血小板聚集和破坏，采取标本后应在1h内完成计数，以免影响结果。
14.3 标本溶血、血小板凝块、高脂血症等均可干扰检测结果，应注意鉴别。
14.4 检查前，患者避免服用含有阿斯匹林及其它抗血小板药物。
14.5 血小板假性减低：如血小板冷凝集、异常蛋白血症、巨血小板、血小板卫星现象、高脂血症，EDTA-K2诱导的血小板聚集。
14.6 假性血小板增高：可来自红细胞和白细胞的碎片、小红细胞、冷球蛋白血症、疟疾等。
14.7 正常血小板具有异质性：正常血小板大小、形态变异较大。
14.8 血小板数量在个体内存在生物学变异，日内变异6.7%，日间变异11.5%，月间变异10.6%。
