1 检验目的
规范白细胞显微镜计数的过程。
2 检验程序的原理
血液用白细胞稀释液稀释后，成熟红细胞全部被溶解，注入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数量，经过换算得出每升血液中白细胞数。
仪器、器材和试剂
5.1 仪器、器材 显微镜 改良Neubauer血细胞计数板 一次性20ul定量取血管 洁净小试管
5.2 试剂：白细胞稀释液(自配)
冰醋酸 2ml
蒸馏水 98ml
10g/L亚甲蓝溶液 3滴
以上试剂混匀备用。
校准程序
一些贫血患者血液中有核红细胞增多，影响白细胞计数，应校正除去。校正公式如下：
白细胞校正数=X×100/（100+Y）.
X=未校正前白细胞数；
Y=在分类计数时，计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。
程序步骤
试剂准备 于清洁小试管中加入稀释液0.38ml，准确吸取毛细血管血或EDTA-K2抗凝静脉血20ul，擦去管尖外附着血液，轻轻将血置于相同编号的稀释液试管中，并吸取上层清液，嗽洗吸管二次以上，最后用手摇动试管混匀，待红细胞破坏完全后混匀充池，静置2~3min，待白细胞下沉。
计数 用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞数：
白细胞数=4个大方格内白细胞数×0.05×109/L
8 质量控制程序
8.1稀释用吸管、微量吸管、血细胞计数板均为计量工具，使用前需要经过严格的校正，否则将直接影响计数结果的准确。
8.2在充池时，如充液不足、液体外溢、断续充液、或产生气泡、充液后移动盖玻片等，均会使细胞分布不均匀，造成计数结果不准确。
8.3计数大小方格内的压线细胞时，遵循数上不数下，数左不数右的原则。
8.4白细胞数量过多时，可采用加大稀释倍数的方法。如10ul血加入到0.39ml稀释液中。
8.5白细胞数量过少时，可采用扩大计数域的方法，计数8个或9个大方格；也可采用减少稀释倍数的方法。
8.6细胞计数时掌握误差规律，严格遵守操作规程，减少误差，以获得准确的结果。
8.6.1经验控制
①根据白细胞计数结果与血涂片上白细胞分布密度是否相符来粗略判断计数结果的准确性。
②与红细胞相对比较：正常情况下，红细胞数/白细胞数约为500：1
8.6.2常规考核标准（RCS）
根据白细胞在计数池内四大方格内的分布情况规定：
RCS=四大方格内白细胞最大值－最小值／四大方格白细胞数平均值
白细胞≤4×109/L者，RCS＜30%；白细胞（4.1～14.9）×109/L者，RCS＜20%；白细胞≥15×109/L者， RCS＜15%。超过上述标准，均为不合格。
如果超过上述标准者，应重新混匀悬液，滴入另一个计数池中进行计数，直至符合标准才可报告。
9 结果计算及测量不确定度
9.1结果计算：白细胞数=4个大方格内白细胞数×0.05×109/L
9.2测量不确定度 参照CLIA＇88推荐的允许误差，确定本室白细胞显微镜计数相对扩展不确定度：±15.0%
10 生物参考区间：
成人，静脉血
男（3.97～9.15）×109/L
女（3.69～9.16）×109/L
11 检验结果的可报区间
WBC：（0.0～400）×109/L
12 警告/危急值：
＜2.5×109/L ＞28×109/L，出现危急值按《危急值报告程序》处理。
13 实验室的结果解释
13.1白细胞生理变化：
①年龄：初生儿白细胞一般在15×109/L左右，个别可高达30×109/L以上。通常在3～4天后降至10×109/L左右，约保持3个月，然后降至成人水平。
②日间变化：WBC在静息状态时较低，活动和进食后较高；早晨较低，下午较高；一日中最高值与最低值之间可相差1倍。
③运动、疼痛和情绪的影响：一般的体力劳动、冷热水浴、日光或紫外线照射等，均可使WBC轻度增多，而剧烈运动、剧痛和激动可使白细胞显著增多。如剧烈运动，可于短时间内使白细胞高达35×109/L，以中性粒细胞为主，当运动结束后迅速恢复原有水平，这种短暂的变化，主要是由于循环池和边缘池的粒细胞重新分配所致。
④暴热和严寒，白细胞总数常有一过性增高，复温后迅速恢复至正常水平。
⑤妊娠与分娩：妊娠期常见白细胞增多，特别是最后1个月，常波动于（12～17）×109/L，分娩时可高达34×109/L。分娩后2～5天内恢复正常。经期白细胞也可增多。
由于白细胞的生理波动很大，只有通过定时和反复观察才有意义。
13.2白细胞病理变化
①病理性增多：如大部分化脓性细菌所引起的炎症、尿毒症、严重烧伤、传染性单核细胞增多症、传染性淋巴细胞增多症、急性出血、急性溶血、组织损伤、大手术后等；某些白血病及恶性肿瘤晚期。
②病理性减少： 病毒感染、伤寒、副伤寒、黑热病、疟疾、再生障碍性贫血、极度严重感染、X线及镭照射、肿瘤化疗后、非白血性白血病等。
干扰因素、交叉反应及潜在误差来源
15.1稀释液要过滤，小试管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。
15.2 计数池内的细胞分布应均匀，一般情况下各个大方格间的细胞数相差不超过10%。若相差太大，应重新充池。
15.3 贫血患者血液中有核红细胞增多，影响白细胞计数，可使白细胞计数结果偏高，应校正除去。
15.4溶血时间太短或红细胞抵抗溶解，如网织红细胞、新生儿红细胞，可使白细胞计数偏高；溶血时间太长，或白细胞已部分破损，如化疗或败血症，细胞体积缩小，可使白细胞漏检。
15.5巨大血小板可计数为白细胞。
15.6新生儿和小儿常采用毛细血管血，毛细血管血与静脉血有差异；痛哭后毛细血管血白细胞计数结果增加。
15.7白细胞数量在个体内存在生物学变异，日内变异19.9%，日间变异16.3%，月间变异17.3%
