B:分子信标探针
分子信标探针是可形成发夹结构的寡核苷酸探针,5′末端标记荧光素(EDANS),3′末端标记淬灭剂(DABCYL) ,探针噜扑环与目的DNA 碱基互补,噜扑环两侧为与目的DNA 无关的碱基互补的臂。当探针与靶序列相连,淬灭基团与报告基团逐渐远离,遂发出荧光。
C:FRET杂交探针
FRET杂交探针基本原理是:一套FRET探针包括2条探针:一条为锚定探针,通常为长探针,结合于模板的保守区域;另一条为感受探针,通常为短探针,包含了特异性序列。两个荧光基团,一个为供体基团,另一个是受体基团,其中一个标记于上有探针的3'端,另一个位于下游探针的5'端。当两条探针都能与模板结合时,则由于荧光能量共振转移的原理使得受体基团发光。
D:SYBRGreen探针
SYBRGreen探针是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下,SYBR Green发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强。因此,SYBR Green的荧光信号强度与双链DNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。
(五)PCR-ELISA
PCR-ELISA是PCR与酶联免疫吸附(ELISA)技术相结合的检测方法。PCR-ELISA首先通过生物素-亲和素的交联作用,将3'端标记有生物素的捕获探针固定在链霉素亲和包被的微孔板上。然后通过生物素、地高辛、荧光素酶等标记的引物给PCR产物加上抗原标记。将扩增产物与捕获探针杂交,靶序列被捕获,再向微孔中加入酶标抗体,抗体与靶序列上的抗原结合,最后加入底物显色,测定相应波长的吸光度值。加入内标,作出标准曲线后,PCR-ELISA技术也可实现定量检测。PCR-ELISA法简便经济,只要具备PCR仪和酶标仪即可实施,特异性和灵敏度均较高,特别适宜大量样品的筛检。
(六)数字式PCR(DigitalPCR)
数字PCR是最新的绝对定量技术,他基于单分子PCR方法来采用计数的方法对DNA进行定量,因此是一种



















